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Descrição da atividade anti-Candida albicans de um fragmento da crotalicidina, PAM de glândula de veneno de Crotalus durissus

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Introdução: A crotalicidina (Ctn), uma catelicidina de 34-resíduos isolada de cascavel da América do Sul, e o seus fragmentos (Ctn[1-14] e Ctn[15-34]) demonstraram previamente atividades antimicrobiana contra bactérias Gram negativas, citotóxica contra células tumorais, e antifúngica contra cepas de Candida sp e dermatófitos. A extensão de tais efeitos tem sido relacionada com suas características físico-químicas, como a forma helicoidal e hidrofobicidade. Objetivos: O presente trabalho teve o objetivo geral de caracterizar a atividade antifúngica e os possíveis mecanismos de ação do fragmento Ctn[15-34] contra Candida albicans. Métodos: Para caracterizar a atividade anti-Candida do Ctn[15-34] foram realizados ensaios para estabelecer a curva do tempo de morte, após tratamento da células com as CIM e CIM/2 do Ctn[15-34] e da Anfotericina B. Para determinar atividade fosfolipásica, Foi utilizado o lipídio cromogênico 4N3OBA como substrato e Ctn[15-34] nas CIM e CIM/2. Foi relizada leitura de absorbância a 425nm em intervalos de 10 minutos, durante 40 minutos. Para avaliar a interação do peptídeo com a célula de C. albicans foi utilizado o Ctn[15-34] marcado com carboxifluoresceína por 0, 0.5, 1, 2, 4. Foi utilizado iodeto de propídio como marcador de viabilidade celular. Para estudo da via de morte celular as células de C. albicans foram incubadas a 30oC com Ctn[15-34] e AMB, nas concentrações equivalentes aos respectivos valores de CIM e 0.5CIM, durante 0, 12 e 24 h. Em seguida foram coradas com 7-actinomicina D (7-AAD) e Anexina V-FITC para avaliar a integridade celular e a externalização da fosfatidilserina. Todos os ensaios foram realizados em triplicata. As médias obtidas ± erros padrão de medição foram comparados através de análise de variância unidirecional (ANOVA) e os dados foram analisados por Bonferroni (software SPSS versão 16.0-IBM Corporation, Somers, NY). As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas se: * p <0,05. Resultados: A análise das curvas de tempo de morte das células tratadas com Ctn[15-34] e AMB, mostrou que eles não reduziram o número de UFCs da mesma forma, sugerindo que Ctn[15-34] e AMB poderiam ter diferentes mecanismos de ação contra C .albicans. O dano à membrana plasmática foi estimado com base na quantidade de produto gerada pela atividade fosfolipásica após tratamento do lípido 4N3OBA (substrato) com Ctn[15-34]; a 10 μM pode ser observado um grande aumento na atividade fosfolipásica em comparação com os lipídeos não tratados, e tratados com 5 μM. Ctn[15-34] promoveu rompimento da membrana celular, assim como outros peptídeos antimicrobianos (PAMs), em leveduras. O peptídeo interagiu com a membrana após apenas 30 minutos de incubação. Além disso, a via de morte após o tratamento com peptídeo foi a necrose, o que confirmou ainda mais a capacidade de dano da membrana celular por Ctn[15-34]. Conclusão: O Ctn[15-34] apresentou atividade significativa contra cepa de C. albicans e em um tempo muito inferior a anfotericina B, e se apresenta como um promissor modelo para o tratamento de tratamento de doenças fúngicas causadas por C. albicans. Apoio Financeiro: Capes.