Avaliação da expressão de genes relacionados a danos de dupla fita de DNA em paciente com síndrome mielodisplásica

Introdução: As síndromes mielodisplásicas (SMD) constituem um grupo heterogêneo de doenças clonais que cursam com hematopoese ineficaz e displasias em uma ou mais linhagens celulares mieloides. Acredita-se que na doença a integridade genômica possa estar comprometida uma vez que alterações citogenéticas são geralmente observadas e associadas a fatores de mal prognóstico de acordo com o Revised International Prognostic Scoring System (IPSS-R). Os genes Ataxia Telangiectasia Mutated (ATM) e Ataxia Telangiectasia and Rad-3 related (ATR) estão relacionados a função de reparo a danos da fita dupla de DNA. A resposta ao dano de DNA (DDR) da célula está relacionada a sua capacidade de detectar e sinalizar problemas em seu DNA com o objetivo de ativar mecanismos apropriados de reparo. A DDR é de fundamental importância na manutenção da integridade genômica e na proteção contra o desenvolvimento do câncer. Como a SMD é uma doença caracterizada por citopenias periféricas, aumento da apoptose, medula hipocelular, normocelular ou hipercelular, hipermetilação, entre outros processos, acredita-se que os genes ATM e ATR possam estar envolvidos na fisiopatologia da doença. Objetivos: Avaliar a expressão dos genes ATM e ATR em pacientes com SMD e relacionar com variáveis clínicas, hematológicas e com fatores de prognóstico. Métodos: O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Federal do Ceará (PROPESQ) sob parecer 1.764.073. Foram incluídas no estudo 111 amostras de medula óssea (MO) de pacientes portadores de SMD. Foram coletados 20 mL de MO em seringa heparinizada para realização do cariótipo por banda G e as amostras para a obtenção do pool celular foram coletadas em tubos Vacutainer® contendo EDTA. As amostras do pool celular foram utilizadas para a extração de RNA e síntese de cDNA. As reações de PCR em tempo real para genes endógenos (Ubiquitina C, β2-Microglobulina e Gliceraldeído fosfato desidrogenase) e genes alvo (ATM e ATR) foram realizadas, em duplicatas, no aparelho 7500 Fast Real-Time PCR System® (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) utilizando sondas TaqMan assay® e as amostras de cDNA. Todas as análises estatísticas foram efetuadas com recurso do software SPSS para Windows (versão 21.0). Para a avaliação de normalidade foi utilizado o teste de Shapiro-Wilk e ouliers foram removidos. Na comparação de médias entre dois grupos foi utilizado o teste t de Student e para três ou mais foi utilizado o teste de ANOVA one-way. O pós-testes para a ANOVA one-way utilizados foram teste de Tukey e Games Howell definidos a partir do teste de homogeneidade de variâncias de Levene. O nível de significância estatística utilizado foi de p<0,05. Resultados: A média de idade dos pacientes foi de 67 anos, sendo 49,55% dos indivíduos pertencentes ao sexo masculino e 50,45% ao feminino. A expressão do gene ATM foi menor em pacientes com disgranulopoese em relação aos que não possuem (p<0,01) e nos que apresentaram contagem de neutrófilos <800/mm³ em relação aos com ≥800/mm³ (p=0,019). A expressão do gene ATR foi menor no grupo de pacientes com 2 ou 3 citopenias em relação ao grupo com 0 e 1 citopenias (p=0,002) e no grupo com contagem de neutrófilos <800/mm³ quando comparado ao grupo ≥800/mm³ (p=0,032). Conclusão: A expressão dos genes ATM e ATR está associada a fatores de mau prognóstico em pacientes com SMD e isto sugere que esses genes podem ser potenciais novos marcadores de risco clínico na doença. Apoio Financeiro: CAPES